紫外可见分光光度计对于我们来说熟悉却也比较难读懂理解的。

天天有人提起他的名字却没多少人知道他的工作原理。

下面我们来浅谈一下。

光谱工作原理：

分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。

由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同；

因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线；

可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。

分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。

它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。

根据Lambert-Beer定律说明光的吸收与吸收层厚度成正比，比耳定律说明光的吸收与溶液浓度成正比；

如果同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对光吸收率的影响，即得朗伯-比耳定律。

即A=εbc，(A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度)就可以对溶液进行定量分析。

将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。

若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。

如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。

这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。

实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同;

这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。

紫外可见分光光度计的工作环境：

1）分光光度计安放在干燥的房间内，使用温度为5-35℃，相对湿度不超过85%

2）仪器应放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动

3）室内照明不宜太强，且应避免直射日光的照射

4）电扇不宜直接向仪器吹风，以防止光源灯因发光不稳定而影响仪器的正常使用

5）尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电气设备

6）避免在有硫化氢等腐蚀性气体的场所使用